VIVE. Revista
de Investigación en Salud
https://revistavive.org
Volumen 6 No. 17, mayo-agosto
2023
ISSN: 2664-3243
ISSN-L: 2664-3243
pp. 464 – 481
Efecto
cicatrizante en incisiones periodontales por extracto hidroalcohólico
de Morinda citrifolia
Healing effect on periodontal incisions by hydroalcoholic extract of Morinda citrifolia
Efeito cicatrizante do extrato hidroalcoólico
de Morinda citrifolia em
incisões periodontais
Carlos Samuel Ramos Meza
carlos.ramos@vrin.uandina.edu.pe
https://orcid.org/0000-0002-8103-6704
Erika Eleana Corzo Palomo
ecorzo@uandina.edu.pe
https://orcid.org/0000-0002-4911-0601
Luis Alberto Olivera Trujillo
013200500c@uandina.edu.pe
https://orcid.org/0000-0002-2946-0444
Juan Carlos Valencia Martinez
jvalenciam@uandina.edu.pe
https://orcid.org/0000-0002-6024-3392
Yeni Gutierrez
Acuña
ygutierrez@uandina.edu.pe
https://orcid.org/0000-0002-3836-3398
Universidad Andina del Cusco. Cusco, Perú
Artículo recibido el
8 de abril 2023 / Aceptado el 25 de abril 2023 / Publicado el 8 de mayo 2023
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https://doi.org/10.33996/revistavive.v6i17.238
RESUMEN
Los tratamientos
periodontales implican cortes y sangrado de la mucosa gingival; la Morinda citrifolia,
específicamente sobre los fragmentos encargados de la cicatrización
(plaquetas), tiene un efecto más significativo en los procesos curativos de las
lesiones. Objetivo. Identificar el
potencial cicatrizante de los extractos hidroalcohólicos
de Morinda citrifolia (noni peruano) en los procesos regenerativos de las
incisiones periodontales al 70% a diversas concentraciones (1%; 5; y 10%) y su
efecto coadyuvante acelerador en la vía oral como curación de tejidos. Materiales y Métodos. Se realizó una
investigación aplicada, bajo el diseño experimental. Para ello, se llevó a cabo
un estudio previo para el análisis farmacognóstico,
porcentaje de humedad, pruebas de solubilidad y el análisis fitoquímico
cualitativo para garantizar que el análisis farmacológico y la prueba
experimental se completaran adecuadamente. Se administraron dosis a cinco ratas
albinas macho Holtzman divididas en cuatro grupos a
los cuales se les aplicó las concentraciones en cantidades de 0,5 ml dos veces
al día en la incisión, la cual se evaluó durante siete días para obtener
parámetros específicos, como infección, tono de piel gingival, cierre de
heridas, reducción del tamaño de la incisión y porcentaje de curación. Resultados. Indicaron que todos los
grupos que se le suministró el extracto hidroalcohólico
al 70% en varias concentraciones mejoró su actividad curativa al reducir el
tamaño de la incisión en la encía al séptimo día, donde resultó que la mejor
concentración fue del 5% en comparación con las otras concentraciones (1% y
10%). Investigación que indica la eficacia de la Morinda citrifolia peruana como acelerador del
proceso de curación en la terapia periodontal.
Palabras clave: Morinda; Incisión
Quirúrgica; Enfermedades Periodontales; Efecto cicatrizante
ABSTRACT
Periodontal
treatments involve cuts and bleeding of the gingival mucosa; Morinda citrifolia,
specifically on the fragments in charge of healing (platelets), has a more
significant effect on the healing processes of the lesions. Objective. To identify the
healing potential of hydroalcoholic extracts of Morinda citrifolia
(Peruvian noni) in the regenerative processes of periodontal incisions at 70%
at various concentrations (1%; 5; and 10%) and its accelerating coadjuvant effect in the oral route as tissue healing. Materials and Methods.
An applied research was carried out under an experimental design. For this
purpose, a previous study was carried out for pharmacognostic
analysis, moisture percentage, solubility tests and qualitative phytochemical
analysis to ensure that the pharmacological analysis and experimental test were
properly completed. Doses were administered to five male Holtzman
albino rats divided into four groups to which the concentrations were applied
in 0.5 ml amounts twice daily to the incision, which was evaluated for seven
days for specific parameters, such as infection, gingival skin tone, wound
closure, incision size reduction and percentage healing. Results. They indicated that all
groups that were given the 70% hydroalcoholic extract
in various concentrations improved their healing activity by reducing the size
of the gingival incision on the seventh day, where it turned out that the best
concentration was 5% compared to the other concentrations (1% and 10%). Conclusion. Research indicating the efficacy of Peruvian Morinda citrifolia as an accelerator of the
healing process in periodontal therapy.
Key words: Morinda; Surgical Wound;
Periodontal Diseases; Healing activity; Healing effect
RESUMO
Os tratamentos periodontais
envolvem corte e sangramento da mucosa gengival; a Morinda citrifolia, especificamente sobre os
fragmentos responsáveis pela cicatrização (plaquetas), tem um efeito mais
significativo nos processos de cicatrização das lesões. Objetivo. Identificar o potencial cicatrizante de extratos hidroalcoólicos de Morinda citrifolia (noni peruano) nos
processos regenerativos de incisões periodontais a 70% em diversas
concentrações (1%; 5; e 10%) e seu efeito coadjuvante
acelerador na via oral como cicatrizante tecidual. Materiais e métodos. Foi realizada uma pesquisa aplicada sob um
desenho experimental. Para esse fim, foi realizado um pré-estudo
para análise farmacognóstica, porcentagem de umidade,
testes de solubilidade e análise fitoquímica
qualitativa para garantir que a análise farmacológica e o teste experimental
fossem adequadamente concluídos. Cinco ratos albinos Holtzman
machos divididos em quatro grupos foram dosados e as concentrações foram
aplicadas em quantidades de 0,5 ml duas vezes ao dia na incisão, que foi
avaliada por sete dias quanto a parâmetros específicos, como infecção, tônus
gengivais da pele, fechamento da ferida, redução do tamanho da incisão e
porcentagem de cicatrização. Resultados.
Eles indicaram que todos os grupos que receberam extrato hidroalcoólico
a 70% em várias concentrações melhoraram sua atividade de cicatrização ao
reduzir o tamanho da incisão gengival no sétimo dia, sendo que a melhor
concentração foi de 5% em comparação com as outras concentrações (1% e 10%). Conclusão. A pesquisa indica a eficácia
da Morinda citrifolia
peruana como um acelerador do processo de cicatrização na terapia periodontal.
Palavras-chave: Morinda; Ferida Cirúrgica;
Doenças Periodontais; Efeito de cura
INTRODUCCIÓN
Durante varios siglos, diversas culturas de todo el mundo han
empleado productos herbales y naturales como parte de su medicina tradicional,
y solo recientemente diferentes científicos y profesionales médicos han
centrado su atención en este campo, reconociendo los numerosos beneficios. La
utilidad terapéutica del reino vegetal se deriva de sus componentes fitoquímicos bioactivos, que
tienen efectos fisiológicos tanto en especies humanas como animales. Estos
constituyentes incluyen alcaloides, aceites esenciales, flavonoides, taninos, terpenos,
saponinas y químicos fenólicos, entre otros (1).
Morinda citrifolia es un
arbusto importante nativo de la India de la familia Rubiaceae, pero ampliamente distribuido en Australia desde el sudeste
asiático (2,3). En Malasia, también se le conoce como gran morinda,
nonu, morera india o mengkudu,
en el sudeste asiático como nhaut, en el Caribe como
arbusto analgésico o fruto del queso, en Australia como canario (4), y en Perú
como noni peruano. Morinda citrifolia incluye valores nutricionales
como minerales, vitaminas, carbohidratos y otros nutrientes que ayudan a
metabolizar los nutrientes directa o indirectamente y son apropiados para el
crecimiento de células y tejidos (5). Existen efectos antimicrobianos,
reductores del colesterol, inmunes y que mejoran la digestibilidad de varios
compuestos biológicos identificados en diferentes partes de la planta (6,7). Morinda citrifolia
tiene valiosos componentes fitoquímicos que mejoran
la curación, como los taninos y los flavonoides (8). Por lo tanto, la acción de
la Morinda citrifolia,
específicamente sobre los fragmentos encargados de la cicatrización
(plaquetas), tiene un efecto significativo en los procesos curativos de las
lesiones, lo que resulta en una recuperación en menos tiempo del tejido, en
donde se produce una reacción inflamatoria después de un daño o condición
patológica de la mucosa oral.
La cicatrización de heridas es una reacción biológica que
requiere tres momentos de respuesta en el cuerpo, es decir, inflamación,
proliferación y remodelación (9), las cuales se asocian con la expulsión de
microorganismos infecciosos, acompañado de una proliferación marcada por
angiogénesis, que es la formación de nuevos vasos sanguíneos, depósito de
colágeno, formación de tejido de granulación, epitelización
y contracción de la herida.
El proceso de regeneración tisular restaura la integridad y
función de los tejidos (10). Es importante mencionar que las heridas necesitan
una terapia adecuada para que puedan sanar rápidamente y sin complicaciones. Un
fuerte indicador en la cicatrización de heridas es la cantidad de fibroblastos
que se muestran en la mucosa oral. A medida que se sintetizan las fibras de
colágeno, la proliferación de células de fibroblastos disminuye en la fase de
remodelación de la cicatrización de heridas. Una porción de la planta de noni, la hoja de noni (Morinda citrifolia),
se usa tradicionalmente para curar heridas de tejidos blandos (11) porque las
hojas poseen compuestos orgánicos potenciales útiles en el proceso de
regeneración de tejidos. La velocidad y la calidad de la cicatrización de las
heridas dependen de muchos aspectos específicos, como los factores genéticos y
las características de la lesión, así como su ubicación, como las áreas húmedas
o fricción continua, y la profundidad de la lesión por pérdida de tejido que
luego evolucionará más lentamente que una herida limpia, por lo que tendrá un
mejor pronóstico (12).
El uso de animales de granja en la investigación científica,
la enseñanza y los estudios de laboratorio también se divide en usos biomédicos
y usos agrícolas debido a las restricciones gubernamentales sobre AWR (animals welfare regulations), políticas institucionales, marcos
administrativos, fuentes de financiamiento y objetivos del consumidor. Esta
distinción condujo a un marco dual con parámetros separados para determinar
procedimientos, niveles de vida y tratamiento para animales de la misma
especie, dependiendo de los objetivos de investigación biomédica o agrícola
buscados (13). Esta distinción es evidente en algunos estudios. Por ejemplo,
los modelos animales de enfermedades humanas, el trasplante de órganos y
cirugías mayores son considerados para usos biomédicos; los experimentos de
procesamiento de alimentos y fibras, como los ensayos de alimentación,
generalmente se consideran para usos agrícolas. Sin embargo, como ocurre en
algunas investigaciones sobre dietas y enfermedades, esta distinción tampoco es
clara. Los legisladores, gerentes y miembros de CICUAL (Comité Institucional
para el Cuidado y Uso de Animales) también enfrentan la cuestión de cómo
manejar dichos informes (14).
En base a las propiedades establecida en la justificación de
este este estudio se plantea como propósito identificar el potencial
cicatrizante de los extractos hidroalcohólicos de Morinda citrifolia (Noni peruano) en los procesos regenerativos de las
incisiones periodontales al 70% a diversas concentraciones (1%; 5; y 10%) y su
efecto coadyuvante acelerador en la vía oral como curación de tejidos. Bajo la
hipótesis que el extracto hidroalcohólico al 70% de
frutos de Morinda citrifolia (noni) acelera el efecto curativo a diferentes
concentraciones en las incisiones periodontales inducidas en ratas albinas de
la raza Holtzman.
MATERIALES Y MÉTODOS
Previo al análisis establecido en este estudio, se llevó a
cabo la intervención como una prueba cuasiexperimental
con cuatro grupos de cinco muestras cada una, a los cuales se le aplicaron los
tratamientos correspondientes al grupo de ratas albinas macho de la cepa Holtzman. Quedando establecida la investigación de tipo
aplicada, bajo el diseño experimental porque se manipularon las variables
específicas, con la diferencia de que no existe un control completo sobre todas
las variables, como los aspectos relacionados con el tipo de muestra presentada
al experimento (15). En la Figura 1 se observa el diagrama de flujo establecido
para el estudio experimental.
Figura 1. Diagrama de flujo completo del estudio.
Estudio
farmacognóstico
El área de acopio se realizó en el mercado modelo de la
Provincia de Calca, departamento de Cusco en Perú. Para la selección, se eligió
cuidadosamente el material recolectado, teniendo en cuenta que los frutos
estuvieran totalmente libres de partículas de polvo, manchas, insectos y
hongos. Una vez recolectada la muestra seleccionada, hasta el momento del
secado en bolsas de papel, la especie se mantuvo en óptimas condiciones como se
muestra en la Figura 2.
Figura 2. Recolección, selección y secado de Morinda citrifolia.
Después de eso, para el proceso de secado, la muestra de la
planta se cortó en láminas de aproximadamente 0,5 cm. Durante un período
promedio de 20 días, se secó dentro de un cobertizo de malla plástica en un
área ventilada y sombreada, a temperatura ambiente. Utilizando un molino de
grano limpio y seco, después de la desinfección con etanol al 70%, se llevó a
cabo la transformación del material vegetal (frutos) en partículas gruesas.
Porcentaje
de humedad
Después de los pasos anteriores (secado), esto permitió que
la muestra en el proceso de maceración tuviera contacto con el solvente. La
muestra se cosió en una malla de 3 mm por 3 mm después de haber sido triturada.
Finalmente, el material vegetal estuvo listo para el siguiente paso, que fue
poner en frascos oscuros debidamente etiquetados con el nombre de la planta y
la fecha del tamizado. Se eligió el método de maceración simple en el que,
utilizando una botella de color ámbar con tapón hermético, en donde el material
vegetal (frutos) estuvo en contacto con un volumen de solvente durante un
tiempo determinado, en una proporción de 1:10. El etanol al 70% se mantuvo en
agitación constante durante 15 días a temperatura ambiente con el material el
cual se sometió a maceración con el disolvente como se muestra en la Figura 3.
Figura 3. Secado, molido, tamizado, maceración y extracción de Morinda citrifolia.
Para obtener la extracción en seco, los filtrados obtenidos
se concentraron hasta un tercio en un rotavapor (40
°C en el baño de agua y 37°C en el globo del rotavapor),
de 70 a 100 rpm y de 100 a 300 mbar, para finalmente obtener el extracto seco.
Luego se concentró a sequedad en una estufa a 37 ºC.
Posteriormente se filtraron cada tres días hasta su agotamiento. Luego se
concentró a 37 °C en un horno para que se seque en su totalidad.
Para determinar el porcentaje de humedad se utilizó el método
gravimétrico (el método o análisis gravimétrico es una técnica mediante la cual
se puede determinar la cantidad de un analito; el ion
que se analiza, mediante la medición de la masa. Los análisis gravimétricos
dependen de comparar las masas de dos compuestos que contienen el analito, en donde el precipitado debe ser un compuesto
puro), determinando la pérdida de agua por secado en estufa.
La determinación del porcentaje de humedad se realizó por
triplicado, en placas Petri con 5 g de muestra fresca (frutos de Noni), cortados en trozos pequeños, los cuales se
introdujeron en un horno a una temperatura de 50 °C durante 24 horas, hasta
obtener la muestra seca. El porcentaje de humedad se determinó mediante la siguiente
relación:
Dónde:
PMF: Peso de la muestra fresca
PMS: Peso de la
muestra seca
Esta prueba se realizó en el laboratorio especializado de
Farmacognosia de la Carrera profesional de Farmacia y Bioquímica de la Universidad
Nacional de San Antonio Abad del Cusco. En la Tabla 1 se muestra que la prueba
se realizó con tres muestras diferentes (muestra I, II y III), donde luego se
obtuvo un promedio de 78.49% de humedad.
Tabla 1. Prueba de
porcentaje de humedad.
|
Peso de la muestra |
I |
II |
III |
|
Fresco |
5 g |
5 g |
5 g |
|
Seco |
1.069 g |
1.0655 g |
1.0915 g |
|
%H |
78.62% |
78.69% |
78.17% |
|
Media de %H |
78.49% |
||
La humedad presente en la planta es considerablemente
elevada, por lo que en el proceso de secado y conservación de esta especie debe
tener mucho cuidado en su manipulación. El proceso de secado es importante;
mediante este proceso se interrumpen los procesos de degradación de los
metabolitos provocados por las enzimas, lo que impide el desarrollo de
bacterias, hongos y la producción de reacciones enzimáticas y químicas. (16) El
porcentaje de extracción o rendimiento (% E.E.S) del extracto hidroalcohólico al 70% de los frutos de Morinda citrifolia (Noni)
se obtuvo de la siguiente manera:
Dónde: PF: Peso final del extracto seco
PI: Peso inicial de
la muestra seca molida
EES: Extracción del extracto seco
Esta prueba se realizó en el laboratorio especializado de
farmacognosia de la carrera profesional de Farmacia y Bioquímica de la
Universidad Nacional de San Antonio Abad del Cusco, obteniendo los siguientes
datos, como se aprecia en la Tabla 2, donde se muestra que la prueba se realizó
utilizando tres tipos diferentes de muestras (muestra I, II y III), donde luego
se obtuvo un promedio de extracción del extracto seco del 41.61%.
Tabla 2. Porcentaje de extracción del extracto seco.
|
Peso de la Muestra |
I |
II |
III |
|
Peso inicial |
10 g |
10 g |
10 g |
|
Peso final |
4.263 g |
3.804 g |
4.418 g |
|
% E.D.E. |
42.63% |
38.04% |
44.18% |
|
Mean |
41.61% |
||
Ensayo
de solubilidad (extracto hidroalcohólico al 70% de
los frutos de Morinda citrifolia-noni peruano)
Para realizar la prueba de solubilidad se tomaron
aproximadamente 100 mg del extracto vegetal en diferentes tubos de ensayo,
luego se adicionó 1 ml del solvente de diferentes polaridades (de la más apolar
a la más polar), en caso de que no se disolviera en frío, se procedió a
calentar ligeramente el agua en baño María (17,18).
Los disolventes utilizados para esta prueba fueron: éter
etílico [1], hexano [2], acetato de etilo [3], acetona [4], etanol al 70% [5],
etanol al 96% [6], metanol [7], Agua destilada [8] y Suero fisiológico [9] como
se muestra en la Figura 4.
Figura 4. Ensayo de solubilidad en diferentes materiales.
Se encontró si los solventes eran solubles (++), parcialmente
solubles (+/-) o insolubles (-). Esta prueba se realizó en el laboratorio de
química orgánica de la carrera de Química de la Universidad Nacional de San
Antonio Abad del Cusco (UNSAAC). En esta prueba se utilizaron disolventes de
diferentes polaridades para determinar la solubilidad del extracto, de apolar a
polar, obteniendo los siguientes datos.
El extracto hidroalcohólico al 70%
de los frutos de Morinda citrifolia (Noni) mostró una naturaleza polar y fue insoluble (-) en
éter etílico, hexano, acetato de etilo y acetona (apolar); parcialmente soluble
(+/-) en etanol al 70%, etanol y metanol al 96%, y soluble (++) en agua
destilada y solución salina al 0,9% (polar).
Debido a la naturaleza polar del extracto, se utilizó suero
fisiológico al 0,9% como vehículo para la administración oral. Se utilizó suero
fisiológico al 0,9% por ser una sustancia biocompatible.
Después de todo, es una sustancia isotónica en la sangre y para la limpieza de
heridas.
Análisis
fitoquímico cualitativo
El extracto obtenido fue sometido a pruebas fitoquímicas cualitativas para identificar los grupos de
metabolitos primarios y secundarios. Para ello, se utilizaron pruebas de
coloración y/o precipitación para identificar estos metabolitos en el extracto.
El análisis fitoquímico cualitativo se realizó
siguiendo las metodologías y criterios de evaluación propuestos (19,20).
En esta prueba, se utilizaron reactivos específicos para la
identificación cualitativa completa de estos metabolitos. Se realizaron ensayos
de coloración y/o precipitación, donde la leyenda presentó abundante presencia
(+) de monosacáridos (1; resorcinol), glucósidos (2; Benedict), taninos (5; 5% quetato
de plomo, y 6; cloruro férrico), saponinas (9; espuma) y alcaloides (12; Dragendorff); presencia moderada (+/-) de compuestos
fenólicos (3; cloruro férrico), flavonoides (4; Shinoda),
cumarinas (7; Baljet) y lactonas sesquiterpénicas (8; Baljet), y ausencia (-) de triterpenos
y esteroides (10 y 11; Liebermann-Burchard) como se
muestra en la Figura 5.
Figura
5. Resultado de los materiales fitoquímicos.
Prueba
experimental
Estudio
farmacológico
En el protocolo experimental se utilizaron 20 ratas Holtzman macho con un peso promedio de 250 g, con un tiempo
de adaptación de dos días. Las ratas se mantuvieron a temperatura ambiente (25
a 30 °C) en grupos de cinco por jaula, alimentadas con una dieta balanceada,
agua ad libitum y condiciones ambientales controladas. El material biológico se
distribuyó aleatoriamente en cuatro grupos de cinco animales cada uno (cinco
ratas como grupo control que recibieron solución salina fisiológica al 0,9% y
los otros grupos de cinco que recibieron extracto hidroalcohólico
de Morinda citrifolia al
1%, 5% y 10%) en dosis de 0,5 ml en cada tratamiento, realizándoles dos
tratamientos por día.
Con cuatro plumones indelebles (rojo: control; azul: extracto
al 1%; negro: extracto al 5%; verde: extracto al 10%), cada grupo se identificó
marcando las colas de las ratas. Se utilizaron técnicas asépticas antes del
procedimiento quirúrgico para evitar la contaminación durante el procedimiento
quirúrgico, y todo el material utilizado se desinfectó con una solución de
etanol al 70%. Para evaluar posibles lesiones, todos los animales
experimentales se sometieron a un examen oral antes de la experimentación. Los
extractos se disolvieron en suero fisiológico al 0,9%, con un volumen de 50 ml
a las dosis correspondientes para cada grupo. Para inducir la anestesia, en el
día cero (inicio de los tratamientos), se administraron por vía intraperitoneal 0,1 ml/kg de Dormi-xil
2 (clorhidrato de xilacina) 20 mg/ml y 0,5 ml/kg de ketamina 500 mg/10 ml por vía intraperitoneal
a todos los animales de experimentación con la ayuda de una jeringa de 1 ml
como se muestra en la Tabla 3.
Tabla 3. Calendario de las pruebas de Morinda
citrifolia
|
Día |
Grupo Control |
Experimento 1 (1%) |
Experimento 2 (5%) |
Experimento 3 (10%) |
|
Día 1 (tratamiento) |
Suero fisiológico
0.9% |
0.5 ml; MC 1%
(twice a day) |
0.5 ml; MC 5%
(twice a day) |
0.5 ml; MC 10% (twice a day) |
|
Día 2 |
Suero fisiológico
0.9% |
0.5 ml; MC 1%
(twice a day) |
0.5 ml; MC 5%
(twice a day) |
0.5 ml; MC 10% (twice a day) |
|
Día 3 |
Suero fisiológico
0.9% |
0.5 ml; MC 1%
(twice a day) |
0.5 ml; MC 5%
(twice a day) |
0.5 ml; MC 10% (twice a day) |
|
Día 4 |
Suero fisiológico 0.9% |
0.5 ml; MC 1%
(twice a day) |
0.5 ml; MC 5%
(twice a day) |
0.5 ml; MC 10% (twice a day) |
|
Día 5 |
Suero fisiológico
0.9% |
0.5 ml; MC 1%
(twice a day) |
0.5 ml; MC 5%
(twice a day) |
0.5 ml; MC 10% (twice a day) |
|
Día 6 |
Suero fisiológico
0.9% |
0.5 ml; MC 1% (twice
a day) |
0.5 ml; MC 5%
(twice a day) |
0.5 ml; MC 10% (twice a day) |
|
Día 7 |
Suero fisiológico
0.9% |
0.5 ml; MC 1%
(twice a day) |
0.5 ml; MC 5%
(twice a day) |
0.5 ml; MC 10% (twice a day) |
Luego se colocaron en el área
quirúrgica inmediatamente después de 20 minutos. Se hizo la incisión
periodontal; la incisión lineal se realizó con el mango de bisturí n° 3 con
hojas de bisturí n° 21 horizontalmente en la zona posterior superior izquierda
de la mandíbula superior de unos 10 mm y una profundidad de 2 mm. El sangrado se limpió con un hisopo de algodón después
de la incisión. Luego, con la ayuda de una jeringa de 1 ml (suero fisiológico
al 0,9%, solución de extracto al 1%, solución de extracto al 5%, solución de
extracto al 10%), una vez pasado el efecto de la anestesia, se colocaron en sus
respectivas jaulas. Las soluciones se administraron dos veces al día con una
jeringa de 0,5 ml a cada grupo.
RESULTADOS
Determinación
del porcentaje de curación (%C)
Las incisiones se observaron diariamente durante siete días;
las aplicaciones de los tratamientos se realizaron dos veces al día; la primera
aplicación consistió en administrar las dosis establecidas; la segunda
aplicación consistió en administrar las mismas dosis y observar clínica y
fotográficamente la evolución de las incisiones. En la observación clínica de
las incisiones se evaluaron los siguientes parámetros: inflamación, signos de
infección, color de la encía regenerada y cierre de la encía. En la Tabla 4 se
muestra la evolución del proceso de cicatrización de heridas.
Tabla 4. Resultados de
porcentaje de escala (mn).
|
Grupo |
No Rata |
Días de Tratamiento (mm) |
||||||
|
0 |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
||
|
Control |
1 |
10 |
9.5 |
8 |
7.5 |
6 |
5.5 |
4 |
|
2 |
10 |
9 |
8 |
7 |
6.5 |
5.5 |
3.5 |
|
|
3 |
10 |
9.5 |
8.5 |
7.5 |
6.5 |
5 |
4 |
|
|
4 |
10 |
9.5 |
8 |
7 |
6 |
5 |
4 |
|
|
5 |
10 |
9 |
8.5 |
7.5 |
6 |
5 |
3.5 |
|
|
Avg. |
10 |
9.3 |
8.2 |
7.3 |
6.2 |
5.2 |
3.8 |
|
|
Experimento 1 (MC 1%) |
1 |
10 |
8 |
7 |
6.5 |
5.5 |
3.5 |
2 |
|
2 |
10 |
8.5 |
7 |
6 |
5 |
3 |
1.5 |
|
|
3 |
10 |
8.5 |
7.5 |
6 |
5.5 |
3.5 |
2 |
|
|
4 |
10 |
8 |
7 |
6.5 |
5 |
3.5 |
2 |
|
|
5 |
10 |
8 |
7 |
6 |
5 |
3.5 |
2 |
|
|
Avg. |
10 |
8.2 |
7.1 |
6.2 |
5.2 |
3.4 |
1.9 |
|
|
Experimento 2 (MC 5%) |
1 |
10 |
7 |
5.5 |
3.5 |
1.5 |
1 |
0 |
|
2 |
10 |
6.5 |
5.5 |
3 |
2 |
0.5 |
0 |
|
|
3 |
10 |
6.5 |
5 |
3.5 |
1.5 |
0.5 |
0 |
|
|
4 |
10 |
7 |
5 |
3.5 |
2 |
1 |
0 |
|
|
5 |
10 |
6.5 |
5 |
3 |
2 |
0.5 |
0 |
|
|
Avg. |
10 |
6.7 |
5.2 |
3.3 |
1.8 |
0.7 |
0 |
|
|
Experimento 3 (MC 10%) |
1 |
10 |
7.5 |
6 |
4 |
2.5 |
1 |
0 |
|
2 |
10 |
7 |
6 |
4.5 |
2.5 |
1 |
0 |
|
|
3 |
10 |
7.5 |
6.5 |
4 |
2.5 |
1 |
0.5 |
|
|
4 |
10 |
7 |
6 |
4.5 |
1.5 |
1 |
0 |
|
|
5 |
10 |
7.5 |
6.5 |
4 |
2.5 |
1 |
0 |
|
|
Promedio |
10 |
7.3 |
6.2 |
4.2 |
2.3 |
1 |
0.1 |
|
La curación se midió usando una regla milimétrica de metal.
La siguiente ecuación determinó el porcentaje de curación:
Dónde: H1: tamaño inicial de la herida (mm)
H2: tamaño final de
la herida (mm)
Por lo tanto, el porcentaje promedio del grupo control en el
sexto día fue de 62% de recuperación, mientras que el grupo experimental 1 fue
de 89% de recuperación, el grupo experimental 2 fue de 100% de recuperación y
el grupo experimental 3 fue de 99% de recuperación.
Análisis
estadístico
Para la prueba estadística se utilizó la prueba de normalidad
de Kolmogorov-Smirnov, puesto que esta prueba compara
la función de distribución acumulativa empírica de los datos de la muestra con
la distribución esperada, ya que los datos resultaron ser normales.
La Tabla 5 muestra que el p-valor fue mayor a 0.05 (0.200,
0.200 y 0.102, se acepta que no hay diferencias significativas entre los
grupos) en los días uno, dos y tres de los tratamientos, sin embargo, el
p-valor fue menor a 0.05 (0.001, 0.000 y 0.001) en los días cuatro, cinco y
seis de tratamiento, lo que significa que existen diferencias significativas
entre los grupos, esto significa que los valores no tienen una distribución
normal (no hay homogeneidad de los datos y las variaciones no son homogéneas).
El p-valor p fue inferior a 0,05, teniendo en cuenta el sexto día de
tratamiento (0,001). También se acuerda que no existen variaciones sustanciales
entre las clases.
Tabla 5. Prueba de
normalidad para el porcentaje de escala (%C)
|
One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test |
|||||||
|
|
% Día de curación 1 |
% Día de curación 2 |
% Día de curación 3 |
% Día de curación 4 |
% Día de curación 5 |
% Día de curación 6 |
|
|
Normal Parametersa,b |
N |
20 |
20 |
20 |
20 |
20 |
20 |
|
Media |
21,250 |
33,250 |
47,500 |
61,250 |
74,250 |
85,500 |
|
|
Desv. Vest. |
10,3714 |
11,6161 |
16,4237 |
19,3904 |
19,0066 |
16,0509 |
|
|
Most Extreme Differences |
Absolute |
,151 |
,123 |
,177 |
,261 |
,296 |
,267 |
|
Positive |
,111 |
,123 |
,176 |
,219 |
,149 |
,183 |
|
|
Negative |
-,151 |
-,119 |
-,177 |
-,261 |
-,296 |
-,267 |
|
|
T-statistic |
,151 |
,123 |
,177 |
,261 |
,296 |
,267 |
|
|
Asymp. Sig. (2-tailed) |
,200c,d |
,200c,d |
,102c |
,001c |
,000c |
,001c |
|
|
a. Test
distribution is Normal |
|||||||
|
b. Calculated from data. |
|||||||
|
c. Lilliefors Significance Correction. |
|||||||
|
d. This is a
lower bound of the true significance. |
|||||||
Si p <0.05 = se acepta que no existen diferencias
significativas entre los grupos.
Si p> 0.05 = se acepta que existen diferencias
significativas entre los grupos.
Se realizó la prueba de homogeneidad
de varianzas para el porcentaje de curación (% C). La Tabla 6 muestra que en la
columna Sig. El p-valor varió (1.000, 0.347, 1.000, 0.758, 0.000, 0.011) en
todos los grupos de tratamiento, al séptimo día se observa que en la columna
Sig. el p-valor fue menor que 0.05 (0.011) por lo
tanto no se rechaza la hipótesis nula: se acepta que no existen diferencias
significativas entre los grupos.
Tabla 6. Prueba de
homogeneidad de varianzas.
|
Prueba de
Homogeneidad de Varianzas |
|||||
|
|
Levene statistic |
gl1 |
gl2 |
Sig. |
|
|
% Día de curación 2 |
Se basa en la media |
,000 |
3 |
16 |
1,000 |
|
Se basa en la media
recortada |
,000 |
3 |
16 |
1,000 |
|
|
% Día de curación 3 |
Se basa en la media |
1,185 |
3 |
16 |
,347 |
|
Se basa en la media
recortada |
1,185 |
3 |
16 |
,347 |
|
|
% Día de curación 4 |
Se basa en la media |
,000 |
3 |
16 |
1,000 |
|
Se basa en la media
recortada |
,000 |
3 |
16 |
1,000 |
|
|
% Día de curación 5 |
Se basa en la media |
,395 |
3 |
16 |
,758 |
|
Se basa en la media
recortada |
,187 |
3 |
16 |
,904 |
|
|
% Día de curación 6 |
Se basa en la media |
10,667 |
3 |
16 |
,000 |
|
Se basa en la media
recortada |
8,575 |
3 |
16 |
,001 |
|
|
% Día de curación 7 |
Se basa en la media |
5,197 |
3 |
16 |
,011 |
|
Se basa en la media
recortada |
4,080 |
3 |
16 |
,025 |
|
Si p <0.05 = se acepta que no existen diferencias
significativas entre los grupos.
Si p> 0.05 = se acepta que existen diferencias
significativas entre los grupos.
Demostrar que los valores del
porcentaje de curación en ratas se distribuyen de forma no normal y sus
variaciones son homogéneas en cada grupo experimental; no se aplica la prueba
ANOVA, sino que se aplica la prueba de Kruskal-Wallis
de los valores del porcentaje de curación en ratas de los grupos experimentales.
La Tabla 7 muestra que, en el séptimo día de tratamiento, en la columna Sig. el p-valor fue menor que 0,05 (0,000); por tanto, se rechazó
la hipótesis nula (Ho), aceptando la hipótesis alternativa (H1). Es decir, se
acepta que existen importantes diferencias entre los tratamientos.
Tabla 7. Prueba de Kruskal Wallis.
|
Prueba estadísticaa,b |
|||||||
|
|
% Día de curación 1 |
% Día de curación 2 |
% Día de curación 3 |
% Día de curación 4 |
% Día de curación 5 |
% Día de curación 6 |
% Día de curación 7 |
|
Chi-square |
,000 |
17,704 |
18,199 |
18,130 |
17,261 |
17,713 |
17,967 |
|
gl |
3 |
3 |
3 |
3 |
3 |
3 |
3 |
|
Asymp. Sig. |
1,000 |
,001 |
,000 |
,000 |
,001 |
,001 |
,000 |
|
a.
Kruskal Wallis Test |
|||||||
|
b. Grouping
Variable: Equivalent to group |
|||||||
Si p <0.05 = se acepta que existen diferencias
significativas entre el tamaño medio.
Si p> 0.05 = se acepta que no existen diferencias
significativas entre el tamaño medio.
Estudio histopatológico
Las muestras de encía de todos los
grupos experimentales se extrajeron con cirugía menor una vez finalizado el
proceso de cicatrización. Para eliminar trazas de sangre, secreciones y
materiales extraños, las muestras obtenidas se lavaron con una solución salina
fisiológica al 0,9%. Para la toma de muestras fotográficas, cada muestra
obtenida se colocó sobre papel blanco absorbente. Todas las muestras se
colocaron con formalina al 10% en un recipiente apropiado y previamente
etiquetadas. Finalmente, todas las muestras formalizadas fueron remitidas para
su respectivo estudio histopatológico al Instituto de Patología de la
Universidad Mayor de San Marcos del Hospital Arzobispo Loayza.
En la Figura 6, se muestran los
cuatro grupos. Se puede observar que el grupo control a escala microscópica de
40X, 100X y 400X presentó inflamación leve, ausencia de infección, epidermis
fina, presencia de células fagocíticas, pequeña
cantidad de colágeno y ausencia de úlcera.
Figura 6. Proceso histopatológico de todos los grupos de estudio.
En el grupo experimental 1, hubo una
reacción inflamatoria muy leve, epidermis más gruesa, presencia de células fagocíticas, una cantidad mínima de colágeno y úlceras. En
el grupo experimental 2 se observa poca respuesta inflamatoria, ausencia de
infección, epidermis fina, presencia de células fagocíticas,
una cantidad más significativa de colágeno y presencia de una pequeña úlcera,
mientras que en el grupo experimental 3, reacción inflamatoria, ausencia de
Infección, se observa epidermis gruesa, presencia de células fagocíticas, una cantidad importante de colágeno y
presencia de úlceras.
DISCUSIÓN
El estándar de la investigación científica biomédica y el
desarrollo del conocimiento de la biología se aplica
tanto a los seres humanos como a los animales. El uso de animales como modelos
experimentales durante el siglo XX ha contribuido a los principales
conocimientos científicos y médicos (21). Si bien los científicos también han
producido modelos no animales para estudios científicos educación superior y
pruebas de control (22), estos modelos a menudo no pueden replicar el complejo
cuerpo humano o animal y continuar el desarrollo de la salud y el bienestar de
las personas y que los animales requieren con el uso de animales vivos. Sin
embargo, se deben seguir realizando esfuerzos para crear y utilizar
alternativas científicamente viables y perfeccionar la investigación
experimental en animales.
Dentro de este estudio, se cumplieron
las normas de los principios del gobierno de EE. UU. para
la utilización y el cuidado de animales vertebrados utilizados en pruebas,
investigación y capacitación (23).
La restricción física se utilizó en
el estudio experimental, y es el uso de medios manuales o mecánicos para
restringir algunos o más de los movimientos naturales del animal con el fin de
estudiarlo, tomar muestras, administrar medicamentos y otras manipulaciones
terapéuticas o experimentales. En la mayoría de las situaciones, cuando se
utilizan, los animales se retienen por períodos breves, generalmente minutos u
horas (24,25).
El estudio aporta valor a la
literatura sobre la contribución del extracto de Morinda citrifolia en la aceleración de procesos
regenerativos de la mucosa gingival o procesos periodontales, contribuyendo a
los escasos estudios realizados a nivel mundial sobre el uso de dicha
sustancia. Este artículo contribuye enormemente a otros investigadores en el
proceso regenerativo de las lesiones bucales. Este estudio es relevante en
otros contextos, aumentando así el uso de Morinda citrifolia en diferentes realidades.
El análisis presenta una limitación
principal: el número de muestra utilizado en el siguiente artículo, por lo que
se recomienda a futuras investigaciones ampliar la muestra para obtener datos
más robustos que serían similares a los hallazgos y ser replicables en diversos
contextos y realidades. Otra limitación podrían ser los días de tratamiento
para evaluar la parte histopatológica del estudio, sin embargo, se alinea con
los resultados donde el primer tratamiento alcanzó una curación completa con el
extracto de Morinda citrifolia al
5%.
CONCLUSIONES
A lo largo del desarrollo del estudio realizado con un 70% de
extracto hidroalcohólico de Morinda citrifolia (noni)
a diferentes concentraciones se logró identificar que el 70% de extracto hidroalcohólico
de Morinda citrifolia
aplicadas en ratas macho Holtzman, demostraron un
efecto terapéutico eficaz a una dosis del 5%; además que el contenido de
humedad de Morinda citrifolia (noni peruano) y su porcentaje de rendimiento de la especie
fue del 41,61%; las pruebas de solubilidad y el análisis fitoquímico
cualitativo completo del extracto hidroalcohólico al
70% del fruto de Morinda citrifolia,
demostró que el primer segmento es polar.
Según el estudio fitoquímico
cualitativo completo, los metabolitos primarios y secundarios detectados
estaban presentes en abundantes cantidades de monosacáridos, glucósidos,
taninos, saponinas y alcaloides y pequeñas cantidades de flavonoides, cumarinas, lactonas sesquiterpénicas y compuestos fenólicos; en la eficacia del
extracto hidroalcohólico de Morinda citrifolia al 70%; cabe señalar que la
dosis del 10% logró cerrar las incisiones en un 99%, pero con una reacción
inflamatoria debido a una dosis inapropiada o baja toxicidad; la incisión de la
encía fue probada macroscópicamente durante el tratamiento a los siete días de
tratamiento con un extracto hidroalcohólico al 70% de
fruto de Morinda citrifolia,
se observaron los siguientes parámetros: indicando que se alcanza un cierre
completo de la incisión de la encía con seis días de tratamiento, y las encías
fueron probadas microscópicamente en el séptimo día de tratamiento. Las
lesiones provocadas por la incisión han sido probadas histopatológicamente, lo
que indica que el extracto hidroalcohólico del 70% de
la fruta de Morinda citrifolia (noni) tiene un efecto cicatrizante óptimo en las encías a
una dosis del 5%.
CONFLICTO
DE INTERESES. Los autores declaran que no existe
conflicto de intereses para la publicación del presente artículo científico.
FINANCIAMIENTO.
Los autores declaran que no
recibieron financiamiento.
AGRADECIMIENTO.
Los autores reflejan el esfuerzo y contribución de las personas que
aportaron al desarrollo del presente artículo científico.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
1. Ribeiro-Neto
J, Pimenta-Tarôco B, Batista dos Santos H, Thomé R, Wolfram E, Maciel de A,
Ribeiro R. Using the plants of Brazilian Cerrado for wound healing:
From traditional use to scientific approach.
Journal of Ethnopharmacology.
Volume, 5 October 2020; 260(5):112547.
https://doi.org/10.1016/j.jep.2020.112547
2. Chan-Blanco Y, Vaillant F,
Perez A, Reynes M, Brillouet
J, Brat P. Review of agricultural research, nutritional and therapeutic
properties. Journal of Food Composition and Analysis, 2006; 19: 645-654.
https://doi.org/10.1016/j.jfca.2005.10.001.
3. Dixon A, Mcmillen H, Etkin N. Ferment
This: The transformation of Noni, a traditional Polynesian medicine (Morinda citrifolia, Rubiaceae). Economic Botany, 1999; 53:51-68.
https://doi.org/10.1007/BF02860792
4. Potterat O, Hamburger M. Morinda citrifolia (Noni) fruit--phytochemistry,
pharmacology, safety. Planta Med. 2007 Mar;73(3):191-9. doi:10.1055/s-2007-967115.
Epub 2007 Feb 7. PMID: 17286240.
5. Abou A, Darwis Y, Abdulbaqi I, Khan A, Vuanghao L, Laghari M. Morinda citrifolia (noni): A comprehensive review on its industrial
uses, pharmacological activities, and clinical trials. Arabian Journal of
Chemistry, 2017;10(5):691–707.
https://doi.org/10.1016/j.arabjc.2015.06.018.
6. Hong Y, Yi Y, Han S, Aziz N, Kim H, Park S, Hossain M, Baik K, Choi S, Lee J,
Kim J, Cho J. Morinda citrifolia
noni water extract enhances innate and adaptive immune responses in healthy
mice, ex vivo, and in vitro. Phytotherapy Research,
2019;33(3), 676- 689. DOI: 10.1002/ptr.6256
7. Yang J, Paulino R, Janke-Stedronsky S, Abawi F.
Free-radical-scavenging activity and total phenols of noni (Morinda citrifolia L.) juice and powder in
processing and storage. Food Chem., 2007; 102:302–308.
https://doi.org/10.1016/j.foodchem.2006.05.020
8. Siddiqui BS, Sattar FA, Begum S, Gulzar T, Ahmad F. Chemical constituents from the stems of Morinda citrifolia
Linn. Arch. Pharm. Res. 2007; 30: 793-798. https://doi.org/10.1007/BF02978826
9. García-Salinas S, Evangelopoulos
M, Gámez-Herrera E, Arruebo
M, Irusta S, Taraballi F,
Mendoza G, Tasciotti E. Electrospun anti-inflammatory patch loaded with essential
oils for wound healing. International Journal of Pharmaceutics, 2020;
119067. https://doi.org/10.1016/j.ijpharm.2020.119067
10. Hai Trieu Ly, Minh Trang Pham Nguyen, Thi Kim Oanh Nguyen, Thi Phuong Quynh Bui, Xu Ke,
Van Minh Le. Phytochemical Analysis and Wound-Healing Activity of Noni (Morinda Citrifolia) Leaf Extract,
Journal of Herbs, Spices & Medicinal Plants, 2020;26(4): 379-393, DOI:
10.1080/10496475.2020.1748159
11. Sabirin IP, Yuslianti ER.
Benefits of Ethanol Based Noni Leaf (Morinda citrifolia L.) Extract on Oral Mucosal Wound Healing by
Examination of Fibroblast Cells. J Dent Indones. 2016;23(3): 59-63.
https://scholarhub.ui.ac.id/cgi/viewcontent.cgi?article=1040&context=jdi
12. Nayak BS, Sandiford S, Maxwell
A. Evaluation of the Wound-Healing Activity of Ethanolic
Extract of Morinda citrifolia L.
Leaf. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine, 2009;6(3), 351–356. https://doi.org/10.1093/ecam/nem127
13. Stricklin W, Mench J. Oversight of
the use of agricultural animals in university teaching and research. ILAR
Journal. 1994; 36(1), 9-14. https://www.adsa.org/Portals/_default/SiteContent/docs/AgGuide3rd/Ag_Guide_3rd_ed.pdf
14. Stricklin W, Purcell D, Mench J.
Farm animals in agricultural and biomedical research in: The well-being of
agricultural animals in biomedical and agricultural research. Pp. 1-4 in
Agricultural Animals in Research, Proceedings from a SCAW-sponsored conference,
September 1990;6-7. Scientist's Center for Animal
Welfare.
https://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/b/b6/Animal_Welfare_Information_Center_newsletter_%28IA_CAT10401495015%29.pdf
15. Larsen AK, Holtermann A,
Mortensen OS, Punnett L, Rod MH, Jorgensen MB.
Organizing workplace health literacy to reduce musculoskeletal pain and
consequences. BMC Nursing. 2015;14:46.
https://doi.org/10.1186/s12912-015-0096-4
16. Garnier L, Mounier J, Lê S, Pawtowski A, Pinon N, Camier B, Chatel M, Garric G, Thierry A, Coton E, Valence F. Development of antifungal ingredients
for dairy products: From in vitro screening to pilot scale application. Food
Microbiology, 2018; 81: 97-107. https://doi.org/10.1016/j.fm.2018.11.003
17. Dhawan D, Gupta J. Comparison of Different Solvents for
Phytochemical Extraction Potential from Datura metel Plant Leaves. International Journal of Biological
Chemistry, 2016; 11:17-22. https://doi.org/10.3923/ijbc.2017.17.22.
18. Usman H, Abdulrahman F, Usman A. Qualitative phytochemical screening and in vitro
antimicrobial effects of methanol stem bark extract of Ficus
thonningii (Moraceae). African
journal of traditional, complementary, and alternative medicines. AJTCAM,
2009; 6(3), 289–295. https://doi.org/10.4314/ajtcam.v6i3.57178
19. Khattak U, Ullah, R, Khan SA, Barkatullah Ullah S, Saima. Pharmacognostic evaluation
and analgesic efficacy of ethanolic extract of
Euphorbia dracunculoides L. Pharmacognosy
Journal, 2017; 9(5), 644-653. https://doi.org/10.5530/pj.2017.5.102
20. Yero-Espinosa L, Rodrígues-Fernández
Y, Pérez-Sosa N. Caracterización fitoquímica y
bromatológica de la Thalassia testudinum
usada en alimentación de ovinos pelibuey de Cuba (Ovis aries). Ciencia & Futuro, 2017. 7(3):25-36.
21. Leader R, Stark D. The importance of animals in
biomedical research. Perspectives in Biology and Medicine, 1987;
30(4):470-485.
22. NRC (National Research Council). The Future of
Animals, Cells, Models, and Systems in Research, Development, Education, and
Testing. Proceedings of a Symposium of the Institute of Laboratory Animal
Resources. National Academy of Sciences. 1977; 341 pp.
23. IRAC (Interagency Research AnimalCommittee).
U.S. Government Principles for Utilization and Care of Vertebrate Animals Used
in Testing, Research, and Training. FederalRegister, May
20, 1985. Office of Science and Technology
Policy
24. Reinhardt V. Training adult male rhesus monkeys to
actively cooperate during in home cage venipuncture. Anim. Technol. 1991;42(1):11-17.
25. Reinhardt V. Restraint methods of laboratory
non-human primates: a critical review. Anim. Welf.
1995;4: 221-238.